三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase，ATPase)是一种水解酶，是催化ATP分解产生能量的一种酶，根据所用激活剂、抑制剂以及酶定位的不同分为膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、线粒体三磷酸腺苷酶等。肌球蛋白三磷酸腺苷酶(myosin ATPase)适宜pH为9.2~9.4，被钙离子激活而被镁离子抑制。它分解ATP时所产生的能量供肌肉收缩之用。此酶定位于骨骼肌，常用来区分两型肌纤维。I型肌纤维又称红肌，是慢纤维，即肌纤维的收缩较慢而活动持久，其酶活性高，染色深；II型肌纤维又称白肌，是快纤维，即肌纤维的收缩快，但活动不持久，其酶活性低，染色淡。ATPase水解ATP反应如下：A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量

肌纤维ATPase染色液(钙激活法)的原理是ATPase水解ATP为ADP和磷酸，磷酸与钙离子在酶活性部位结合形成无色的磷酸钙沉淀，磷酸钙经氯化钴处理形成磷酸钴，再经硫化液处理便形成棕黑色的硫化钴沉淀在酶活性部位。此酶利用酸或碱做前孵育处理，用碱做前孵育处理时，仅白肌纤维出现阳性反应，这对肌球蛋白ATPase是特异性的；用酸做前孵育处理时，红肌纤维首先倍染色。因此钙激活法的ATPase染色主要用来区分红肌和白肌，这对神经性肌萎缩和肌源性肌萎缩的诊断有一定价值。